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Entwicklung effizienter CRISPR-Cas9-vermittelter Genom-Bearbeitungs-techniken zur Entwicklung nicht gentechnisch veränderter Pflanzen mit Toleranz gegenüber abiotischem Stress durch eine neue, verbesserte RNP-Einführungs- und Screening-Methode (ASTRA)
Projekt
Förderkennzeichen: 031B0536
Laufzeit: 01.07.2018
- 30.06.2020
Fördersumme: 405.044 Euro
Forschungszweck: Experimentelle Forschung
Das Ziel des Projekts ist die Entwicklung und Etablierung einer neue Technik zur Einführung von Ribonukleoprotein (RNP) sowie die Selektion dieser Ereignisse, um in kurzer Zeit nicht-gentechnisch veränderte Kulturpflanzen zu erzeugen, die gegen abiotischen Stress wie Kälte, Trockenheit und Salzgehalt tolerant sind. In diesem Projekt wollen wir eine neue Methode entwickeln, die sogenannte "Kavitationsblasen-induzierte Schockwellen-vermittelte RNP-Einführung in Pflanzenzellen", die die Zellen weniger schädigen und daher zu einer hohen Regenerationseffizienz der mutierten Pflanzen führen kann. Bei der Verwendung von RNPs werden in diesem Projekt keine Markergene in das Genom eingeführt, daher ist das Screening nach Mutationen mühsam und zeitaufwendig. In diesem Projekt werden wir versuchen, dieses Problem unter Verwendung eines an RNP gebundenen Fluoreszenzfarbstoffs zu lösen, und dann unter Verwendung eines Mikromanipulators Zellen auswählen, die fluoreszierendes RNP aufweisen. Die mutierten Pflanzen werden mit der hochauflösenden Melting-Curve Analyse zur einfachen und schnellen Detektion der Mutation untersucht und durch die Sanger-Sequenzierung bestätigt. Die selektierten Pflanzen werden im Gewächshaus zur Entwicklung von homozygoten T2-Mutanten gezüchtet. Die entwickelten T2 homozygoten Pflanzen werden weiter einer abiotischen Stresstoleranzanalyse unterzogen, um die besten Genotypen zu identifizieren.
Abschnittsübersicht
Fachgebiete
- Pflanzenzüchtung
- Verfahrenstechnik
