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Zellkulturmethoden der humanen nasalen Mukosa zur In-Vitro-Bestimmung der nasalen Arzneistoffabsorption (Fortsetzungsprojekt zu 1328-469)
Projekt
Förderkennzeichen: BfR-ZEBET-08-1328-508
Laufzeit: 01.09.2013
- 31.12.2014
Forschungszweck: Grundlagenforschung
Ziel der Untersuchungen ist die weitere Charakterisierung eines humanen Zellkulturmodells der nasalen Schleimhaut als Ersatz für Tierversuche in Arzneistoffabsorptionsstudien hinsichtlich der Expression aktiver Transportproteine.
Der Efflux von Digoxin bzw. CDCFDA war jeweils signifikant erhöht, wenn kein Inhibitor zugesetzt wurde und deutete damit die Funktionalität von Pgp bzw. MRP1, 3 und 5 an. Die im Zellinneren akkumulierten Erythromycin- bzw. ADV-Mengen waren ohne den jeweiligen Inhibitor signifikant gesteigert und erwiesen so eine Aktivität von MRP2 bzw. 4.
In Abwesenheit des Inhibitors konnte die Funktionalität von SLC15-Proteinen über den aktiven Transport von Gly-Sar in bzw. durch die verschiedenen Modelle nachgewiesen werden. Ebenfalls alle Proben zeigten eine aktive Aufnahme des OCT(N)-Substrats Di-ASP, welche sich durch Inhibitor-Zusatz signifikant reduzierte. Auch für BSP konnte ein aktiver Transport beobachtet werden; bei Zugabe von Inhibitor sanken die eingeschleusten Mengen an OATP-Substrat signifikant.
Die immunhistologische Untersuchung ergab in allen Modellen positive Signale sowohl für Pgp und MRP1 – 5 als auch für PEPT2 und die organischen Kation- und Anion-Transporter. Die Western Blot-Analysen zeigten jeweils Banden des vorhergesagten Molekulargewichts und bestätigten die Expression der zwölf ausgewählten ABC- und SLC-Transporter.
Dolberg, A.M. and Reichl, S. 'Expression of P-glycoprotein in excised human nasal mucosa and optimized models of RPMI 2650 cells', International Journal of Pharmaceutics 508, 22-33, 2016; http://dx.doi.org/10.1016/j.ijpharm.2016.05.010 Dolberg, A.M. and Reichl, S. 'Activity of Multidrug Resistance-Associated Proteins 1-5 (MRP1-5) in the RPMI 2650 Cell Line and Explants of Human Nasal Turbinate.' Mol. Pharmaceutics, 14, 1577-1590 (2017); DOI: 10.1021/acs.molpharmaceut.6b00838
Abschnittsübersicht
Fachgebiete
- Biotechnologie
