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Quantitativer und qualitativer Schnellnachweis vom Lebensmittel stammender Erreger mittels Realtime PCR und Typisierung der Erreger mit der DNA Chip Technologie
Projekt
Förderkennzeichen: BfR-BIOS-08-1322-261
Laufzeit: 01.02.2007
- 31.12.2008
Forschungszweck: Angewandte Forschung
Um das Risiko einer Lebensmittelinfektion für den Verbraucher zu minimieren, spielen mikrobielle Qualitätskontrollen in amtlichen Überwachungsbehörden, in der Lebensmittel-Produktion und Veterinärmedizin eine immer bedeutendere Rolle. Um diesem Anspruch gerecht zu werden, brauchen Untersuchungsämter und andere diagnostische Labore zuverlässige, schnelle und international akzeptierte Nachweissysteme. Bisher erfolgt der Nachweis überwiegend traditionell durch die Kultivierung von Mikroorganismen in artifiziellen Medien, gefolgt von biochemischen und serologischen Identifikationen, die einige Tage bis Wochen dauern können. Eine wirkliche Alternative zum Nachweis von Mikroorganismen in Lebensmitteln bietet die Technik der Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR). Schnelligkeit, Spezifität, Sensitivität und Automatisierung der Technik sind die wichtigsten Eigenschaften der PCR. Oft spielen anschließend die charakteristischen Merkmale eines Isolats bei der Aufklärung von Ausbrüchen und bei anderen epidemiologischen Fragestellungen eine Rolle. Diese können heute zuverlässig durch molekularbiologische Methoden aufgeklärt werden.Im Rahmen des Fortsetzungsantrages des o.g. Forschungsvorhabens soll ein bereits entwickelter DNA Mikroarray zur Charakterisierung und Typisierung von Salmonellen optimiert und validiert werden. Ausgewählte Salmonella-Stämme werden getestet und ihr Risikopo-tential bestimmt werden. Ein DNA Microarray wurde für die simultane Charakterisierung und Typisierung von Salmonella enterica subsp. enterica Isolaten entwickelt und optimiert. Der Array umfasst 280 Sonden, die Flagellin und somatisch kodierende Gene (Serogruppe, Serotyp), wichtige Virulenzgene, die in oder ausserhalb der Pathogenitätsinseln kodiert sind, Phagen assoziierte Gene, Antibiotikaresistenzdeterminanten und mobile Elemente nachweisen. Der Array wurde am Beispiel des Salmonella Serovars 4,12:d:- angewendet. Dieser Serovar wird in Deutschland in Hühnern häufig isoliert.
Abschnittsübersicht
Fachgebiete
- Lebensmittelmikrobiologie